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本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效，可以提取出培养细胞或动物组织中的绝大多数蛋白质。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down和EMSA等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从10⁷个培养细胞或200mg动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以使用50次。

• 提取的蛋白质包括膜，核，核基质和胞质蛋白，而且最大限度保持蛋白质活性。
  
• 整个操作过程只需要30min左右。
  
• 可用于培养细胞(50×10⁷个)又可用于动物组织(50×200mg)蛋白质的提取。
  
• 避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性。
  
• 不需要超速离心，可以同时处理多个样品。

• 所有的试剂及器具均需预冷后使用，以保持蛋白质的完整性和活性。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 理论上超声破碎细胞效果优于摇床振荡破碎。
  
• 一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，则需要将提取的蛋白样品进行透析脱盐。
  
• 可以使用(GS1466)Sephadex重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
  
• 对于提取的蛋白质可以采用百奥莱博的BCA法蛋白质浓度定量试剂盒(GS1480)或非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒(GS1485)或微量BCA法蛋白质浓度定量试剂盒(GS1484)对提取样品中的蛋白质进行定量。
  
• 如果用于蛋白质质谱研究，可采用百奥莱博的铜染(GS1532)或锌染(GS1534)或质谱用快速银染试剂盒(GS1419)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的染色，可以采用通用型蛋白染色液(GS2027)或高灵敏考马氏亮蓝染色液(GS1549)来染色。
  
• 使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 实体组织蛋白的提取
  
  • 向每1mL预冷的Lysis Buffer中加入5μL磷酸酶抑制剂、1μL蛋白酶抑制剂和10μL PMSF并混匀，冰上预冷待用。
    
  • 将100～200mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3 x 3 x 3mm左右的立方体小块，尽量去除脂肪组织及结缔组织等非目的组织，用1X PBS洗涤两次，离心取沉淀后加入0.5～1mL已混匀的预冷Lysis Buffer，4℃玻璃匀浆器冰上匀浆15～30次，同时观察组织是否已经完全裂解并没有明显的小组织块，如还有明显小组织块可以适当增加匀浆次数直至成匀质状液体。
    
  • 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，冰上放置10min左右，期间取出剧烈震荡2～3次；
    
  • 15000g，4℃离心10min，取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，进行蛋白定量和其他蛋白质相关实验。
    
  • 将全蛋白提取物分装保存于-70℃，避免反复冻融。
• 培养细胞蛋白提取
  
  • 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，向100mm培养板中加入10mL预冷的1X PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液。对于悬浮培养的细胞或用细胞刮刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至新的离心管中，500g离心10min，弃掉上清，再向离心管中加入10mL预冷的1X PBS漂洗液，1000rpm离心5min，重复洗两次。
    
  • 向每1mL预冷的Lysis Buffe中依次加入5μL磷酸酶抑制剂、1μL蛋白酶抑制剂和10μL PMSF并混匀。冰上预冷待用。
    
  • 在上述培养板或离心管的细胞中，加入上述配制好的预冷的Lysis Buffer，加入量如下表所示：
    

    细胞数量	培养瓶或培养板的规格	Lysis Buffer加入量
    5×106个	60mm培养板或75cm2培养瓶	0.5mL～1.0mL
    1×107个	100mm培养板或150cm2培养瓶	1.0mL～2.0mL

  • 准备新的预冷的离心管，冷室或冰上操作，贴壁细胞用细胞刮子刮下，连Lysis Buffer一同转移至新的预冷的离心管中。
    
  • 置于4℃摇床平台上，中速(100～150rpm)振荡30min~1h或者超声破碎细胞，每次30sec，3～4次，每次间隔1min，置于冰上冷却，超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％。
    
  • 14000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物，蛋白定量和其他蛋白质相关实验。
    
  • 将全蛋白提取物分装保存于-70℃，避免反复冻融。